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實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)分離方法不一,適用場(chǎng)合也不盡相同。
1. 差速離心法:許多具有生物活性的生物大分子和亞細(xì)胞器是不穩(wěn)定的,需要低溫高速離心,最常用的是差速離心法。通過(guò)離心后倒出上清液和沉淀分開(kāi),把分離出來(lái)的上清液再增大轉(zhuǎn)速離心,分離出第二部分沉淀,這樣不斷增大轉(zhuǎn)速,逐級(jí)分離出所需要的物質(zhì)。利用這種方法可以有效地分離大小上差別較大的顆粒,但不能分離大小相似的顆粒,而且所分離出來(lái)的組分往往是不均一的,雜有其他種類的顆粒。
2.區(qū)帶離心法:其中又可以分為兩種:速率區(qū)帶離心和等密度速率區(qū)帶離心。
1) 速率區(qū)帶離心法:這是將小量懸液放在一平緩的密度梯度液上,用此梯度液來(lái)穩(wěn)定顆粒的沉降。由于離心,顆粒離開(kāi)起始區(qū)帶而移動(dòng),移動(dòng)的速度是由顆粒的大小、形狀和它們所受實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)的離心力來(lái)決定的。離心一段時(shí)間歷,各種穎粒將按照它們的相對(duì)速度移動(dòng)而各個(gè)分開(kāi),成為一系列區(qū)帶。用這種方法我們可以將沉降速度差為20%或者更大的顆粒。
2)等密度區(qū)帶離心法:這是將要分離的顆粒懸液放至密度梯度液上,或者實(shí)際上將顆粒溶于制作梯度的溶液中。通過(guò)離心,顆粒或者上浮或者下沉,達(dá)到與它們自己密度相同的液體處在這里它們沒(méi)有重量,不管離心多長(zhǎng)時(shí)間,它們?cè)僖膊灰苿?dòng)了。這些顆??沙蔀橐幌盗袇^(qū)帶,每種顆粒在它自己的密度區(qū)。所以,這是一種利用顆粒浮密度的大小分離顆粒大小的方法。使用的介質(zhì)通常是氯化銫(Cscl)和硫酸銫(Cs2SO4)。前者適合于DNA分離,后者適合于RNA分離。這種方法與速率區(qū)帶離心法相比,它有一個(gè)主要的缺點(diǎn)是在離心期間,顆粒不可避免地暴露在高濃度的梯度溶液中,會(huì)引起顆粒的部分損傷,并可能出現(xiàn)相當(dāng)于損傷顆粒的一些額外的區(qū)帶 。
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